American Gladiators keert terug met 24 deelnemers uit het hele land die het opnemen tegen 16 felle nieuwe gladiators in klassieke onderdelen als Joust, Powerball, Hang Tough en The Wall, plus nieuwe spelen als The Ring en Collision. Eén man en één vrouw vechten zich naar $100.000 en ultieme gladiatorroem.
Een groep amateursporters neemt het tegen elkaar op, evenals tegen de gladiatoren van het programma zelf, in een reeks uitdagingen, waaronder een zwaar hindernisparcours.